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生物切片制作厂家与您分享切片制作方法

来源:http://www.xxhl58.com/news/99.html    发布时间:2018-05-02    点击:725

一、制备显微标本的切片法

一石蜡包埋切片制作法

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这是***常用的切片法。以石蜡作为组织的填充支持介质,将整块组织加以包埋,***后凝固成均匀一致的固态结构。用切片机制取极薄的切片。为了让石蜡能浸入组织内部,需将组织经过脱水等处理。过程大致如下:
⑴固定:生物标本脱离机体或培养环境,细胞会发生自溶,腐败分解。因此,需用固定剂处理,使蛋白质凝固停止濒死或死后变化。凡供******保存的标本都需经固定处理。
常用的固定剂是甲醛、乙醇等,能使蛋白质凝固。还有由几种试剂配成的固定液,例如Carnoy固定液,由无水酒精、氯仿、冰醋酸配成,固定力更快更强,不含水分,可避免水溶性物质如糖原等在固定过程中损失。
⑵脱水:是将组织细胞所含水分除去。通常用乙醇(Alcohol,酒精),浓度递升到 100%。此过程还使组织块进一步硬化。
⑶透明:是用既能溶于纯酒精又能融解石蜡的有机溶剂,将组织中的酒精取代,以便石蜡浸入。通常用二甲苯(xylene)为透明剂。
⑷浸蜡:在温箱内进行。已透明的组织块放入加热融解的石蜡中,让石蜡浸透组织,作为支持介质。
⑸包埋:将已浸蜡的组织块放入热融的包埋石蜡中,迅速冷凝,组织决便被蜡包埋。
⑹切片:用切片机。常用的切片机有轮转式、平推式的。用轮转式的易于切出连续切片。切片厚度随制片目的而调整。教学标本厚度多是5~6μm。
⑺贴片烤干:石蜡切片在温水上展平后,移在玻片上,烤干,即可供染色处理。染色后用树胶、盖坡片封固,可******保存。
二冷冻切片法
冷冻切片法是借组织在低温下,冻结变硬而达到符合切片要求。冷冻切片法需有冷冻切片机,或在普通切片上配制冷设施。恒冷切片机是高级冷冻切片设备。它有一个恒冷箱,标本致冷台和切片机都装在箱内。恒冷箱的作用类似冰箱,可在一定范围内调整温度,其结构有利于保持箱内恒定低温,减少箱门打开时环境温度的干扰。切片机的轮转把手装在箱外,便于操纵切片。
冷冻切片法的优点是:在处理得当时,它可以******限度地保持组织的新鲜状态。并且,由于不需经脱水、透明、浸蜡等过程中有机溶剂的处理,及湿箱浸蜡热的影响,甚至可不经固定。所以能很好地保存组织细胞的各种成分和酶的活性,因此在酶的组织化学研究中常用此切片法。
二、显示标本结构成分的染色法
一苏木素伊红染色法(HE染色法)
为***常用的染色法。该法应用于各种组织的染色,是组织学技术的基本方法,对任何液体固定的组织和各种包埋的切片均可使用,只是对不同包埋的切片法处理略有不同。下面简介石蜡包埋切片的HE染色法。
1、脱蜡:石蜡切片的组织内部充满石蜡,不能使水溶性染液着色,因此在染色前必须首先用二甲苯将石蜡脱掉,共两次。
2、下行入水:将已脱蜡的标本浸入无水酒精及各级酒精,使组织逐步接近水。3、蒸馏水略洗。
4、苏木素溶液染色约5—15分钟
5、自来水洗去多余染料。
6、入稀释的盐酸酒精溶液中分色,边分色边镜检,至核呈红紫色,细胞质无
色为合适。
7、分色后用自来水或加数滴氨水碱化,直至细胞核变成蓝色。这一步骤也可称为“蓝化”。
8、入蒸馏水洗去碱性水分。
9、入70%酒精→80%酒精各5分钟。
10、入伊红染液染色30秒至数分钟。
11、以95%酒精对伊红分色,至胞浆,结缔组织等呈桃红色。
12、上行脱水:染色后的切片,因组织内含水而不透明,不能清晰地观察其微细结构。因此,须将组织内的水分经各级酒精→无水酒精逐步置换,***后进入不含水份的透明剂内。
13、透明:入二甲苯透明剂,二次(各数分钟)。

14、取出切片:将组织周围多余的二甲苯擦去,滴树胶后加盖玻片封固。

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结果:细胞核蓝紫色,胞浆、胶原纤维、肌纤维为桃红色,嗜酸性颗粒为鲜红色,弹性纤维呈明亮桃红色。




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